ProPresent® MAPPS 抗原呈递化验

发现更多在于用世界领先的 MHC-associated peptide proteomics (MAPPS) 化验

Figure 1: ProPresent® 例子流程在于测量呈递来之蛋白质或者混合蛋白质。抗原呈递细胞内吞蛋白质然后处理和呈递肽连接着 MHC 分子在细胞表面上。溶解细胞之后,HLA-肽用免疫亲和力方法来恢复。肽从 HLA 分子恢复之后,分析使用了 LC-MS/MS 技术。测定的序列都经过严谨的测试来确定证实的阳性肽在于一个很高的信心。

ProPresent® 能够让您准确知道表位来之您的生物治疗药或其他您有兴趣的蛋白质在于呈递在 HLA 分子呈现给 T 细胞。用古典方法来确定肽在于使用 HLA-肽复合物萃取,肽洗脱和接下来的表位确定在于排序使用了质谱方法。

ProPresent® 可以用来确定肽关联在于 HLA-DR, DP 或 DQ 和 HLA I 类。结合了ProImmune’s REVEAL® HLA-肽结合化验和功能性 T 细胞化验,ProPresent® 能够完整的让您了解免疫原性的潜能在于您的药物。

观赏详细的 FDA 研究使用了 ProPresent® MAPPS 化验提出者是 Dr. Zuben Sauna 在我们的 精通免疫 2018 会议在波士顿

重点出版物来之团队从 CSL Behring 调查减少免疫原性在于 sc-rFVIII AFSTYLA®

M. Hofmann, et al. (2017) “Analysis of the Novel Recombinant Factor VIII-SingleChain Protein Predicts A Lower Immunogenic Potential as Compared to Full-length Recombinant FVII”
读完整的抽象
Figure 2: ProPresent® 化验在于调查调制在抗原呈递在 FVIII 通过 VWF. FL-rFVIII 表达独特表位比较与 AFSTYLA® 在没有 pdVWF 的情况下因为 B 域截断。复合 VWF(在一个生理相关比例)大量减少了生产 T 细胞表位在于 AFSTYLA® 比较与观测到的和 pdFVIII 在 VWF 的存在下。相反的,T 细胞表位生产来之 FL-rFVIII 抑制不佳在 VWF *。在 43 独特或高频率呈递来之 FL-rFVIII 的表位(确定在存在和不存在的情况下)有 五个 (洋红色的框,上图的下角) 能够激活 T 细胞增殖在一个 ProMap® 的化验。在前一个 ProPresent® / ProMap® 确定 27 来之 FL-rFVIII-B 域和一个 T 细胞表位共同在 FL-rFVIII和 BDD-rFVIII, 在 AFSTYLA® 不存在。
*健康捐赠者 (n=12) 被选做资源在于 moDCs 的 HLA-DR/DP/DQ 覆盖了 ~80% 的全球人口。每一排的数据显示了 HLA-DR/DP/DQ 呈递的 T 细胞表位来之捐赠者 1-12 针对 FVIII序列都有了等位基因的特定颜色。
**健康捐赠者(n=40),<98% 人口覆盖率,n=57重叠测试人造肽

修短的总结:CSL Behring 开展AFSTYLA® 是第一个和为一个的单练重组的 FVIII分子设计来增加服药间隔同时提供有高度的临床效果。CSL Behring 使用了 ProImmune’s ProPresent® 抗原呈递化验调查 AFSTYLA® 在于抗原呈递通过树突状细胞的 HLA DR, DQ 和 DP。研究显示抗原呈递在 AFSTYLA® 有减少比较与其他商业化的 rFVIII 产品。此外,ProImmune’s ProMap® T 细胞化验也显示了减少 T 细胞表位反应在于 AFSTYLA®。 总体从临床前的研究的化验有一致性相对于已经可得到的临川实验数据在于 AFSTYLA®, 没有找到任何的抑制剂对 AFSTYLA®读完整的抽象

ProPresent® 应用例子

  • 鉴定蛋白质的免疫原性
  • 确定呈递的抗原可来之癌基因,病毒,细菌,病原,疫苗或其他载体
  • 发现新的生物标志物
  • 发现新的目标肽对于癌症和感染病毒的干预措施
  • 了解修改蛋白质的影响在于免疫反应
  • 分开分析对于 HLA-DR, DP, DQ, pan HLA-ABC, HLA-A2, 小鼠 H-2 可得到选项
例子细胞来源

• 肿瘤组织
• 细胞系
• 健康捐赠者细胞
• 治疗患者的细胞样本
• 培养细胞, 比如,DCs, B 细胞和其他等等细胞
抗原来源

• 肽
• DNA / RNA
• 外来体
• 病毒 / 病毒样颗粒
• 细菌
• 裂解物
• 纯化蛋白质
• 混合蛋白质
检测选项

• 突变序列
可来之突变数据库或已建立从外显子组测序

• 修改肽
包括磷酸化,化学修饰,只要是定义明确
灵活,能够分离两个步骤过程

• 第一步(通过客户或 ProImmune来执行):
产生细胞呈递 MHC-肽分子,然后沉淀和冷冻细胞

• 第二步(通过 ProImmune 执行):
细胞裂解和回收肽从 MHC 然后通过质谱台测序

ProPresent® 和免疫原性

知识得到从 ProPresent® 和 ProImmune’s REVEAL® 的免疫原性技术服务提供给您需要的资料来了解和管理免疫原性在于生物治疗物或其他蛋白质化合物。我们的系统允许比较在于数据来之一组捐赠者样本和协助解释在病人的特定等位基因会是高或低风险在于不良反应对于一个生物化合物。这个化验兼容与全面配置的生物制剂也能够用来比较其他不同的蛋白质,或不同的配置在于一样蛋白质对于改造在表位呈递的模式。ProImmune’s 全蛋白质 ProScern® DC-T 细胞增殖化验ProMap® T 细胞增殖化验可以用来验证功能相关性在于表位确定通过 ProPresent®

观赏视频提出者 Dr. Jad Maamary 来之 Merck 解释他们怎么使用 ProPresent® 来分析自然处理和呈递肽从 ipililumab 和 nivolumab

应用方法对于 ProPresent® 抗原呈递化验

• 表位发现和表征

  • 建立表位对于监控病人反应在于一个疫苗或生药物
  • 了解知道的或怀疑的过敏原
  • 确定免疫原性的影响在于序列变体在一样的蛋白质,例如,在病毒蛋白质,或在致瘤点突变
  • 调查人口偏见在于表位反应通过用类过等位基因类的捐赠者

• 风险分析在于生药物

  • 确定呈递的表位在食品添加剂或其他消费品,例如,化妆品
  • 确定呈递表位在药品和其他生物产品
  • 比较和对比呈递的表位在不同批,配置或生产方法在一样的生药物,来早期知道任何安全顾虑

• 了解免疫反应对于生物仿制药和生物制剂

• 鉴定底线对于安全评估;比较新产品对于鉴定过,安全的比 较蛋白

• 产生数据来支持监管意见书

详细的流程对于 ProPresent® 抗原呈递化验技术服务在于 ProImmune 提供树突状细胞

  • 客户提供蛋白质
  • 一组的等位基因类过,健康捐赠者的外周血单个核细胞(PBMC)样本来之 ProImmune 的组织库(赛选了等位基因的分配选择)
  • 单核细胞来之捐赠者的 PBMC 培养在一个定义媒体和区别出来生产树突状细胞(DC)
  • DC 加了测试抗原然后被诱导成熟
  • DC 被收获,HLA 分子纯化然后洗脱关联的肽
  • 肽样本分析通过质谱
  • 质朴的数据比较与一个蛋白质的数据库包含着样本的序列和 Swiss-Prot 数据库在于选择的生物
  • 肽排名成通过重要性根据基于概率的算法
  • 数据验证通过寻找一个扰码数据库来减少误报
  • 一个完整的数据库已编译,列出全部检测到的表位包括呈递在于嵌套表位集和锚分析对于特色的等位基因和一个总结的检测到的蛋白质对照
  • 交货时间是大概 6 周,取决于项目的范围

经常问起的问题

ProPresent® 可以用来调查抗原呈递通过冻存细胞吗?

可以。我们能够提取 MHC-肽 复合物从保存完好的细胞用在 ProPresent® 然后给您独特见解在于呈递的肽在细胞表面上。

我需要怎么验证表位测定通过 ProPresent® 呢?

我们推荐测试那些肽在我们的 ProMap® T细胞增殖化验,但是还有许多其他可得到的选项 – 直接联系我们询问最好的建议。

ProPresent® 在语境

ProImmune 提供许多模块化工具对于了解免疫反应。我们能够提供的体外方法可以鉴定序列在一个抗原能够结合到 HLA 分子,和了解这个序列能不能够照成 T 细胞反应。但是,功能性化验不能够反映许多重要的复杂内部细胞过程在呈递抗原通过 HLA II 类。这个处理过程是被鉴定通过我们的 ProPresent® 抗原呈递化验,让您确定自然呈递的肽在抗原刺激过的 DC。这个方法自动的包含自然的编辑活动,比如基于蛋白酶的切割和泰编辑通过 HLA-DM 和其他抗原呈递的通路成分。

以下的表总结了关键要素行驶了理想的免疫原性风险评估策略在于生物化合物和 ProImmune’s 的技术服务适合在每一个阶段。

重点出版物对于 ProPresent®

团队在 FDA 和 CSL Behring 调查呈递在于 FVIII-来之的肽在DCs 来之单核细胞从血友病患者还有健康捐赠者

Wojciech Jankowski, Yara Park, Joseph McGill, Eugene Maraskovsky, Marco Hofmann, Vincent Diego, Bernadette Luu, Tom Howard, Roberta Kellerman, Nigel Kay and Zuben Sauna

Peptides identified on monocyte-derived dendritic cells: a marker for clinical immunogenicity to FVIII products Blood Advances 2019 3:1429

团队在 Novo Nordisk 和 FDA 调查免疫原性在于改造的 F-VIIa

Kasper Lamberth, Stine Louise Reedtz-Runge, Jonathan Simon, Ksenia Klementyeva, Gouri Shankar Pandey, Søren Berg Padkjær, Véronique Pascal, Ileana R. León, Charlotte Nini Gudme, Søren Buus and Zuben E. Sauna

Post hoc assessment of the immunogenicity of bioengineered factor VIIa demonstrates the use of preclinical tools Science Transl. Med. 2017 9:372

团队在 Nutricia Research 和 Utrecht 大学调查致耐受潜力在于水解奶配方

Joost Gouw, Juandy Jo, Laura Meulenbroek, Sam Heijer, Erica Kremer, Elena Sandalova, André Knulst, Prescilla Jeurink, Johan Garssen, Anneke Rijnierse, Léon Knippels LMJ

Identification of Peptides with Tolerogenic Potential in a Hydrolyzed Whey-Based Infant Formula Clin Exp Allergy 2018

AAPS 会议报告发表通过作家来之 Amgen, Novartis, Genentech and ProImmune

M. Benjamin Hock, Karen E. Thudium, Monserrat-Carasco-Tiguero and Nikolai F. Schwabe (2015)

Immunogenicity of Antibody Drug Conjugates: Bioanalytical Mehtods and Monitoring Strategy for a Novel Therapeutic Modality The AAPS Journal, Vol. 17, No 1, January 2015, 35-43

团队在 Pfizer 探索抗原呈递对于治疗性单克隆抗体

Xue, L., Hickling, T., Song, R., Nowak, J., & Rup, B. (2015)

Contribution of enhanced engagement of antigen presentation machinery to the clinical immunogenicity of a human IL-21 receptor‐blocking therapeutic antibody. Clinical Experimental Immunology; (Accepted Article); 24 September 2015

团队在 Sanofi Pasteur 验证 CMV 表位通过 ProPresent®

Ventura C. et al

HLA-DR and HLA-DP Restricted Epitopes from Human Cytomegalovirus Glycoprotein B Recognized by CD4+ T-Cell Clones from Chronically Infected Individuals
J. Clin. Immunol. (2012) 32:6 1305-1316

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