ProMap® CFSE T 细胞增殖化验

黄金标准在于映射幼稚 T 细胞反应

ProImmune 的 ProMap® T 细胞增殖化验可以用来鉴定表位序列在于引出辅助性 T 细胞增殖因此有可能照成辅助 T 细胞免疫反应。

不像传统的化验基于在放射性胸苷技术,这个化验用强大的流式细胞术,能够准确的确认细胞增殖的百分点和详细的 T 细胞表型反应,这全都能进步整体的敏感性。

为什么选 ProMap® CFSE 增殖化验?

CFSE 染料久经考验的方法被引用过在上千个文献

敏感度比放射性分析高

流式读出的数据解析了需要检测的细胞群,比如活性的 CD4+ T 细胞

进一步的子集表型能够容易的加入和增殖的子集可以同时读出

积分化验检测全增殖在一个增殖的大体时间而不是在一个时间窗的孵化总点时间

重点出版物:

证实人性化抗体用 ProMap® T 细胞化验通过 [dstl] 发表文献,英国国防部的一份

Figure 1:比较重叠肽的T细胞反应在鼠类和人性化V区域的一个抗体

O’Brien LM, Goodchild SA, Phillpotts RJ, Perkins SD.

Virology (2012) 426(2):100-5.[PMID:22341308]

研究员在英国政府国防科学技术实验室 [dstl] 用了ProImmune’s T 细胞增殖化验证实他们的人性化在于抗委内瑞拉吗脑炎病毒 (VEEV) 抗体。人性化的序列是合理的设计方法在于用人的蛋白质序列的抗体代替动物蛋白质序列。但是,这个方法不能保证生物会有低的免疫原性。通过序列扫描体外T细胞化验,免疫原性数据可以产生显示了嵌合体和人性化的不同。这里读充分的案例

ProMap® T 细胞化验和肽/蛋白质治疗

这个 ProMap® T 细胞增殖化验是设计来鉴定有潜能的T细胞表位的存在性还有这个化验有用在临床前肽或蛋白质的发现。这个化验可以展现问题在于‘相对的免疫原性‘在之间的候选药物,或者可以提供指示在于成功的蛋白质工程策略在接触免疫的潜能免疫治疗。

作为 ProImmune’s REVEAL® 免疫原性系统的一部分,数据从ProMap® T 细胞增殖化验可以一起分析和无细胞 HLA-peptide 结合化验多过 50 个 Class II HLA 等位基因。这会给客户一个详细资料在于辅助T细胞的免疫反应对于一个或以上的候选药物。

Figure 2: ProMap® T细胞增殖化验原理
  • PBMC 在于 20-50 HLA 分型捐赠者选从 ProImmune 的血库
  • 合成肽根据项目的需求
  • 捐赠者 PBMC 染了CFSE 染料
  • 每一个肽和每一个捐赠者的 PBMC 共培养
  • CD+4 T 细胞增殖反应照成稀释 CFSE 的标记
  • 流式细胞术检测应用了CFSE 染 CD4+ T 细胞, 是用来量化细胞分裂,和提供检测免疫原性

在我们的“精通免疫 2020 会议”的短片中,Tim Hickling 博士(免疫安全负责人, Roche)描述了 ProMap® T 细胞增殖测定法在生物治疗剂的去免疫中的应用。

ProMap® T 细胞增殖化验的详细资料

细胞都染了荧光染料 5,6-carboxyflurescein diacetate succinimidyl ester (CFSE). 这些增殖的细胞对于和反应抗原会显示 CFSE 荧光指数减少,然后会用流试直接检测。以来这是个流式细胞的化验,这可以准确地确定 CD4+ T 细胞增殖的百分点,能够让详细的表型在于 T 细胞反应,还有这是比较敏感对于传统的化验基于在放射性胸苷技术。

ProImmune 能够提供两种T细胞增殖化验:

ProMap® T 细胞化验在于肽表位映射

这个化验是用来鉴定那些肽表位序列能够引出辅助 CD4+ T 细胞增殖因此潜在地激活辅助性 T 细胞免疫反应照成抗药物抗体的反应或其他不想要的免疫原性。这个化验也可以用来检测蛋白质序列的益免疫原性,比如表位发现在于免疫治疗。

这个化验意向专注在 CD4+ 辅助性 T 细胞反应,消耗的 CD8+ T 细胞和 CFSE 标记捐赠者的 PBMC 共孵化每一个肽7天在 5uM 六个重复井。每一个化验的盘包含一套未经处理的对照井。这个化验也是包括了阳性对照的抗原,包含着人造肽的MHC Class II 抗原,和两个有力的全蛋白质抗原。

Figure 3: 例子的染色数据从幼稚T细胞化验,(1) CFSE 标记T细胞单独培养在介质而已(未激活),(2) CFSE 标记T细胞和检测抗原共培养,(3) CFSE 标记T细胞阳性对照蛋白质 (Tuberculin PPD) 共培养。

细胞增殖是用流式细胞术确定的。对于 ProMap® T 细胞化验,激活百分点高过背景是确认在每一个激活样本,通过数据比较与为刺激样本。计算在于 CD4+ CFSE暗淡的群在每一个样本都表达为全 CD4+ 群的比例。这六个重复的数目是用来计算激活百分点高过背景(CD4+ CFSE 暗淡的细胞抗原激活过的比例减去 CD4+ CFSE暗淡未抗原激活的比率)。

平均和平均值的标准吴都计算来之六个重复的数目。这个数据成为阳性如果激活百分点高过背景 0.5% 还有高过背景 2x 平均值的标准吴,数据也是有提供在于比较不严格的背景让比较弱的反应成为阳性。

为了比较肽,反应指数都有计算。这个指数是基于反应的力量(激活百分点高过背景)在于每一个肽乘几个捐赠者对每一个肽的反应(免疫原性百分点)。

数据提供在报告里:

  • 免疫原性百分点(捐赠者队列的反应对每一个肽的比例)
  • 反应指数
  • 反应的重大,基于 one-way ANOVA 对于 p ≤ 0.05 门槛
Figure 4: 用 ProMap® T细胞增殖化验检测免疫原性百分点:队列的43个捐赠者用来检测有潜能的免疫原性在于肽从重链区来之两个治疗单克隆抗体,Remicade 和 Humira。每一个捐赠者用不同的颜色来代表。肽引出的反应从两个以上的捐赠者都值得考虑做进一步的调查。
Figure 5: 反应指数从 ProMap® T细胞增殖化验:数据和 Figure 4 一样的化验。反应指数给了指示在于力量还有几个捐赠者对肽有反应。注意 PPD 的反应已经超过图形的规模了。