ProImmune REVEAL® MHC 多肽结合检测化验

通过世界上被引用次数最多的 MHC 多肽结合检测服务,了解您需要了解的信息

体外 MHC 肽结合分析可以做预测工具做不到的事情。他们根据其序列确认实际肽的物理结合特性。

ProImmune 是提供体外 MHC 肽结合检测的世界领先者,提供最广泛的 MHC 等位基因和测定选项,从高通量筛选到候选肽之间的深入竞争测定。我们的专业免疫学咨询团队可以帮助您定义项目需求并快速定制最相关的检测解决方案。

美国 FDA 研究人员发布的 ProImmune REVEAL® 数据:

美国 FDA 的研究人员及其同事使用 ProImmune REVEAL 来了解治疗性因子 VIII 蛋白的免疫原性如何根据种族群体的 HLA 组织类型而变化 (Pandey G.S. et al. PLOS Computational Biology May 2013, Vol. 9 (5) e1003066):


Figure 1. (A) FVIII 野生型肽的结合评分。表 1 中以粗体显示的合成野生型肽在 REVEAL 检测中的结合评分是测量的。每行代表一个肽,每列代表一个 MHC-II 等位基因。这些肽基于 FVIII 基因中 H2 至 H6 单倍型出现的位置分组在一起。在每个 ns-SNP 的位置周围使用重叠肽。阳性对照 (PC) 肽是 FVIII 的已知 T 细胞表位,阴性对照 (NC) 肽来自 FVIII 蛋白中尚未鉴定出 T 细胞表位的区域。T绑定分数的比例显示在图的顶部;深色代表以高亲和力结合 MHC-II 等位基因的肽。 (B) FVIII 高亲和力结合剂。显示了结合分数 > 15% 的野生型肽,并被认为是六个 MHC-II 等位基因中每一个的潜在 T 细胞表位。(C) 野生型 FVIII 肽的结合杂乱评分。显示了每个肽的结合杂乱评分,定义为肽结合的 MHC-II 变体的分数 > 15%。

ProImmune REVEAL® 广泛适用于许多疾病领域,包括癌症和传染病的所有领域。借助该技术检测的新 CD4+ 和 CD8+ T 细胞表位可用于评估蛋白质抗原性或作为疫苗开发的核心构建块或作为新免疫疗法的靶标。


Figure 2. 用于 I 类和 II 类 MHC 的 ProImmune REVEAL 检测的示例流程。
  1. 在每种情况下,都会为相关项目合成肽,基于 ProImmune 的多功能 thinkpeptides 肽合成平台。使用的肽可以是任何相关形式,无论是重叠序列还是单独选择的肽。
  2. 然后在每种情况下将肽​​与重组 MHC 分子一起孵育,并以免疫测定形式测量 MHC 肽复合物的稳定性。
    • 在每种情况下,都可以在单个时间间隔内以高通量测量组装和解离,从而允许并行筛选许多等位基因和肽,并且成本可承受。
    • 或者,或作为对特别感兴趣的肽的后续跟踪,可以进行更深入的速率测定,以建立更详细的开启和关闭速率特征。
  3. 表位验证可以使用 MHC 多聚体进行,例如用于 MHC I 类的 ProVE® 五聚体或用于 MHC II 类的 ProT2® 四聚体对。作为替代方案,或与 MHC 多聚体技术相结合,可以进行功能检测,例如 ELISpot、细胞内细胞因子染色的流式细胞术分析或增殖检测,以获得特定肽的功能确认。

在这篇简短的(22 秒)感言中,来之 Chonnam National University 的 YoonJoo Choi 教授描述了他与 ProImmune 合作使用 REVEAL® MHC-多肽结合测定来确认 T 细胞表位删除导致的蛋白质去免疫的经验。

完整的演示文稿可以在这里查看

表扬 ProImmune REVEAL®

Prof. Julio Delgado, University of Utah, USA “ProImmune 体外系统的优势在于,我们可以单独表征与每个 HLA 分子的结合,而不必猜测患者表达的哪些 HLA 分子范围负责抗原呈递“。 

Dr. Gene Olinger, United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases (USAMRID) “ProImmune 在两个月内完成了在我们实验室需要三年的时间 ”

主要出版物:

ProImmune REVEAL® 用于鉴定与淋巴瘤免疫治疗相关的新型 CD20 特异性 CD4+ T 细胞表位

Milcent B., Siberil S. et al, (2019), “Presence of T cells directed against CD20-derived peptides in healthy individuals and lymphoma patients” Scientific Reports (2019),Vol. 9, Art.No. 10165 Cancer Immunology, Immunotherapy

缩写摘要:
临床前和临床研究表明,用抗肿瘤抗体治疗癌症会诱导特定的适应性 T 细胞反应。CD4+ T 细胞在这一过程中发挥了核心作用。在这项研究中,表征了受 HLA-DR1、HLA-DR3、HLA-DR4 和 HLA-DR7 限制的人类 CD20 衍生表位。
这项研究的结果表明,精心挑选的 CD20 衍生的 MHC II 限制性肽可以在人源化 HLA-DR 转基因小鼠和人类 PBMC 中诱导 CD20 特异性 CD4+ T 细胞反应。这些肽可以作为 B 细胞恶性肿瘤的治疗工具,在疫苗接种策略的背景下,通过帮助 CD8+ T 细胞反应并最终通过直接的细胞毒性效应功能来提高 CD4+ T 细胞的抗肿瘤活性。

Figure 3. 筛选免疫原性 HLA-DR 限制性 CD20 衍生肽。(a) 人类 CD20 衍生肽与重组 HLA-DRB101:01(蓝色)、03:01(红色)、*04:01(绿色)和 *07:01(紫色)分子结合的累积评分,如使用 ProImmune REVEAL® MHC-肽结合检测计算。将人 CD20 分子的细胞内、跨膜和细胞外结构域内的高评分肽合并成 9 种不同的 18 至 20 聚体 MHC II 限制肽混合物(huMHC II_Mix 1 至 9)(另见补充表 1)。 (b) 不同 MHC II 限制性 CD20 衍生肽混合物的定位(huMHC II_Mix 1 至 3 为红色;huMHC II_Mix 4 为绿色;huMHC II_Mix 5 为深蓝色;huMHC II_Mix 6 至 8 为浅蓝色;huMHC II_Mix 9 为粉红色)。

你会得到什么?

ProImmune REVEAL® 数据在我们针对该检测范围的详细报告模板中报告。报告显示来自所选特定检测的数据。


Figure 4. REVEAL Class II 例子数据报告结合的百分点比率对阳性显示成绿色。红色的覆盖:稳定指数孵化过了24小时在37度。
Class I HLAClass II: HLA DRClass II: HLA DQ
A*01:01A1*01:01/B1*01:01A1*01:01/B1*05:01
A*02:01A1*01:01/B1*15:01A1*05:01/B1*03:01
A*03:01A1*01:01/B1*03:01A1*01:02/B1*05:02
A*11:01A1*01:01/B1*04:01A1*01:02/B1*06:02
A*24:02A1*01:01/B1*11:01A1*03:01/B1*03:02
A*29:02A1*01:01/B1*13:01A1*01:02/B1*06:04
B*07:02A1*01:01/B1*07:01A1*05:01/B1*02:01
B*08:01A1*01:01/B1*01:02A1*02:01/B1*02:02
B*14:02A1*01:01/B1*04:02A1*03:01/B1*03:01
B*15:01A1*01:01 /B1*04:04A1*02:01/B1*03:03
B*27:05A1*01:01/B1*04:05A1*03:03 /B1*03:03
B*35:01A1*01:01/B1*04:07Class II: HLA DP
B*40:01A1*01:01 /B1*04:08A1*01:03/B1*01:01
Class I: H-2A1*01:01/B1*09:01A1*01:03/B1*03:01
H-2KbA1*01:01/B1*10:01A1*01:03/B1*04:01
H-2DbA1*01:01/B1*11:02A1*01:03 /B1*04:02
H-2LdA1*01:01/B1*11:03A1*01:03/B1*05:01
H-2KdA1*01:01/B1*11:04A1*02:01/B1*01:01
H-2DdA1*01:01/B1*15:02A1*02:01/B1*02:01
Class I: MamuA1*01:01/B1*16:01A1*02:01/B1*04:01
Mamu-A*01A1*01:01/B1*16:02A1*02:01/B1*04:02
Mamu-A*02A1*01:01/B3*02:02A1*02:01/B1*05:01
Class II: IAA1*01:01/B5*01:01A1*02:01/B1*09:01
H-2IAbA1*02:01/B1*11:01
H-2IAdA1*02:01/B1*13:01

Remicade®的高通量 ProImmune REVEAL®数据

Figure 5. ProImmune REVEAL® 结果显示代表 Remicade® (Infliximab) 小鼠可变区部分的 II 类 HLA 结合肽对群体的影响。 Remicade® 是一种非常成功的治疗炎症性自身免疫疾病的药物,也显示出很高的免疫原性发生率。ProImmune REVEAL® 的高通量特性使研究人员能够基于实际的实验结合研究,全面了解单克隆抗体或治疗性蛋白质的整个结构域如何与来自全球人群的 HLA 分子相互作用。

ProImmune REVEAL® 应用法

  • 快速、全面的表位定位,通过实验解决 MHC 结合限制
  • 研究蛋白质的不同变体的免疫原性,例如病毒不同进化枝中免疫原性蛋白可变区和保守区的比较
  • 优化临床监测,例如选择用于监测目标患者组的最佳五聚体特异性
  • 通过多个等位基因鉴定肽的交叉呈递
  • 改进疫苗设计和功效
  • 诱变研究:用于治疗应用的表位结合优化,例如在仅具有部分或弱锚定的肽序列中插入锚定残基

ProImmune REVEAL® 的优点

  • 物理检测。实验结果克服了 MHC 肽结合预测的假设性质
  • 速度。快速获取实验数据
  • 灵活性。我们的 ProImmune REVEAL® 系统有许多选择,既可以对多种等位基因的多种肽进行高通量分析,也可以对特定 MHC 类型的少量肽进行深入分析。的 MHC 等位基因到深入检测少数量的多肽对特定 MHC 等位基因。我们的免疫销售专家团队能够配置一份计划书达到您的项目要求
  • 负担能力。ProImmune REVEAL® 的可扩展性和灵活性意味着可以设计一个项目来满足您的预算目标。我们可以将要回答的最重要问题具体化,并设计可以分阶段管理项目风险的项目

进步知识产权地位

鉴定治疗性蛋白质或其他感兴趣蛋白质的单个表位允许围绕递送方法或其治疗用途将该蛋白质的知识产权 (IP) 与 IP 分开。在疫苗开发过程中,为特定表位定义 IP 增加了未来产品设计变更的选择。如果感兴趣的蛋白质中特定抗原的 IP 没有得到保护,竞争组织可能有机会发展阻碍性专利地位。

经常问起的问题

题:获得 ProImmune REVEAL® 项目的报价需要哪些信息?

答:理想情况下,我们需要知道您感兴趣的肽序列以及您希望我们筛选的 MHC 等位基因。然而,我们可以仅根据肽段和等位基因的数量为您提供大纲报价,这将是您确定项目范围的良好开端。

题:这项服务需要多长时间?

答:这在很大程度上取决于项目范围,包括所用肽的数量和规格。一旦我们知道您的项目目标,我们将始终通过报价为您提供预计交货时间。

题:有了所有可用的选项,我该如何决定哪一个最适合我?

答:基于我们在与您讨论您的要求时所形成的理解,我们将能够为您提出最合适的项目范围,并讨论这如何适合您更广泛的研究目标和其他化验工作。

案例分析:

ProImmune REVEAL® & ProVE®快速表位发现系统用于鉴定 HIV-1 中的新型 T 细胞表位

Westrop, S.J. et al. (2009). “Novel approach to recognition of predicted HIV-1 Gag B35:01-restricted CD8 T-cell epitopes by HLA-B35:01+ patients: Confirmation by quantitative ELISpot analyses and characterisation using multimers.” J Immunol Methods. 341: 76-85. [PubMedID: 19056394]


Figure 6. 对照和 12 种被认为是潜在表位的肽的 MHC 肽结合测定结果;结合信号显示为相对于通过/失败对照的百分比;肽 8,HPVHAGPIA(红色)通过五聚体染色进一步验证

Figure 7. 对 CD3+ 细胞门控的活淋巴细胞进行 Pro5® 五聚体染色;左图显示等位基因错配阴性对照五聚体染色,右图显示 HA9 (B*35:01/HPVHAGPIA) 五聚体染色。 0.39% 的 CD3+ 活淋巴细胞是 CD8+/HA 五聚体+,背景染色为 0.03%。

作者评论说,这项研究“证实了新的 ProImmune 技术是揭示潜在免疫原性表位的有用且优越的工具”,并强调了使用功能检测并行验证结果的重要性,例如 ELISpot 和 Pro5® 五聚体染色。

主要出版物

了解 Baxter(现为 Shire)如何使用 ProImmune REVEAL® 来了解人类因子 VIII 治疗的免疫原性:

Steinitz, K. et al . “CD4+ T-cell epitopes associated with antibody responses after intravenously and subcutaneously applied human FVIII in humanized hemophilic E17 HLA-DRB1*15:01 mice.” Blood (2012)[PubMedID:22394599]

请参阅 ProImmune REVEAL® 和 ProVE 客户出版物