ProScern® CFSE DC-T 细胞
增殖化验

最好的评估方法在于比较全蛋白质的免疫原性

这个高度敏感和通用性的 ProScern® DC-T 细胞化验能够检测候选的蛋白质激活辅助性 CD4+ T 细胞增殖照成抗药物抗体反应或其他不想要的免疫原性。


CD4+ T 细胞增殖检测使用了流式细胞术在于 CFSE 染料稀释,这是个敏感检测细胞增殖的检测方法。

重点出版物在于 ProScern® DC-T 细胞化验数据

John Steven, Caroline Jane Barelle et al., Front Immunol. (2017); 8: 1361. “In Vitro Maturation of a Humanized Shark VNAR Domain to Improve Its Biophysical Properties to Facilitate Clinical Development”. doi:10.3389/fimmu.2017.01361

Figure 1: Proliferative DC T cell assay response used to assess immunogenicity of monomeric VNAR proteins E06, BB10, BA11, BB11, and 2G. (C) Table of calculated response index values. Positive control antigens used for the assay were (i) Tuberculin purified protein derivative (PPD from Mycobacterium) at a final assay concentration of 5 µg/mL (70–100% of donors are expected to react to this protein) and (ii) keyhole limpet hemocyanin, a recognized highly immunogenic protein (adapted from original figure).

ProScern® DC-T 细胞化验在于全蛋白质免疫原性赛选

ProScern® DC-T 细胞化验在于赛选全蛋白质有个广范围的应用。这能够给一个总体的比较在于 T 细胞驱动的免疫原性在于许多候选药物在临床前的阶段。蛋白质序列之外,至关重要的也可以取数在于影响免疫原性的因素。这些分别可以包括比较生物仿制药,蛋白质修改,产品退化,化学物输送在组合疗法,辅药,药物公式和稳定性。

另外,在有些案例可能不能用抗原直接刺激 PBMC,尤其是抗原有修改T细胞功能的反应。为了避免化验的干扰,抗原可以用 DC 细胞提成抗原,让相对免疫原的候选药物做直接的比较。

ProScern® DC-T 细胞化验方法概述

这个化验用样本从 ProImmune 的健康人血库经过高分辨率的 MHC Class II HLA分型检测。可以选有代表性的健康捐赠者覆盖一个特定的群或者模仿全球群中等位基因的频率。通常使用 40-50 捐赠者,取决于理想规模的研究。

捐赠者的 PBMC 是用在单核细胞的来源培养在定义的介质生产未成熟的 Dendritic cells (DCs). DCs 被加载了测试抗原(全蛋白质),然后被诱导成一个比较成熟表型通过更长久培养在定义的介质。PBMC 从同样的捐赠者样本标记了 CFSE 燃料然后和抗原填装的 DCs 孵化 7 天。每一个 DC-T 细胞培养包含一套没有处理过的对照。这个化验也是包含了两个有力的全蛋白质抗原做阳性对照。
Figure 2: 例子染色数据从 DC-T 细胞化验,(1) CFSE 标记T细胞一起和 DCs 共孵化没有共培养抗原,(2) CFSE 标记T细胞一起和 DCs 共孵化之前共培养了测试全蛋白质抗原 (Drug 1), (3) CFSE 标记 T 细胞和 DCs 共孵化之前共培养了阳性对照抗原 (Tuberculin PPD)。

反应指数在于评估免疫原性

评估免疫原性的时候,考虑适当的捐赠者细胞反应频率在一个实验是很重要的。一个阳性反应(百分点刺激比背景多过 5%)在两个以上单独的捐赠者样本是当作为指示性的潜能在体内的T细胞反应。考虑到阳性捐赠者的细胞反应也是一个重要点。这个是确认通过平均刺激的百分点高过背景来之接受的捐赠者在每一个药物。反应指数的计算法是反应的强度乘捐赠者反应的频率。这个指数会比较有代表性比起检测的方法只包括反应的频率而已。

如果只有一个阳性反应观测到在一个捐赠者样本上在其中一个 T 细胞化验,这显示了增殖免疫反应是通过至少六分之一的 HLA Class II 等位基因提成在捐赠者。

Figure 3: 数据在于 DC-T 细胞化验检测在 40 捐赠者和 4 个测试蛋白质 (这个案例,治疗抗体) 和两个阳性对照。

明显的展现在 figure 3,全人类抗体药物4得到最少的反应指数,显然了最低的体外免疫原性在这个 ProScern® DC-T 细胞化验。符合预期,人性化抗体(药物 2 和 3)显示了下一个最低的免疫原性然后嵌合体抗体(药物 1)显示了最高的免疫原性。不一样的治疗蛋白质会得到特定级的免疫原性所以这个可以直接量化在ProImmune 的 DC-T 细胞化验。

ProImmune 的专长在于 DCs 培养

通过开发我们的 ProScern® DC-T 细胞增殖化验和 ProPresent® 抗原提成化验,我们有大量的专长用 DCs。如果您有需要化验在这一方面的技术,欢饮您联络我们一起寻找合作机会:我们的特别化验技术服务可能可以给您一个与众不同的研究项目。