ProImmune REVEAL® 和 ProVE® MHC I 类

服务详细资料

ProImmune 的 I 类 REVEAL® 和 ProVE® 快速表位发现系统是一种定制的模块化服务,可在数周而不是数月或数年内筛选任何蛋白质的 T 细胞表位。

该技术显着加快了 T 细胞表位发现过程,并克服了与耗时、劳动密集型功能检测和有限患者样本量相关的挑战。

我们的服务消除了在您的实验室中设置检测的成本和精力,并以最小的检测变化快速获得结果。模块化系统根据明确定义的时间表运行,因此显着降低了表位发现项目中的时间不确定性。

可用于 ProImmune Class I REVEAL® 和 ProVE® 的等位基因

模块 1:定制肽库合成

目的:快速、经济高效地合成肽库

ProImmune REVEAL® 和 ProVE® 表位发现系统包括一系列需要合成肽的体外测定程序。 ProImmune 可以基于其多功能 thinkpeptides 平台提供定制肽的高通量合成。

模块 2:MHC-肽结合试验

目的:候选肽与 MHC 等位基因的定量结合及其 MHC 限制性测定

与两种对照肽相比,高通量 MHC 肽结合测定可快速确定每种候选肽与一个或多个 MHC 等位基因结合的能力。肽结合测定是对每种肽稳定三元 MHC-肽复合物的能力的量度。检测基于 MHC-肽复合物的天然构象是否存在。

每个肽都有一个相对于阳性对照肽的分数,阳性对照肽是一个已知的 T 细胞表位。分数报告为测试肽相对于阳性对照肽产生的信号的百分比。客户可以选择任何或所有通过 MHC 肽结合试验的肽用于 ProVE® 五聚体合成。

Figure 1: 说明肽(红色)与 MHC 蛋白(蓝色)和 β-2 微球蛋白(灰色)的结合;当各个成分以正确的构象聚集在一起时,就会产生阳性信号。

模块 3:ProVE® 五聚体库合成

目标:生产 MHC I 类五聚体,可用于验证细胞样本上的 T 细胞表位

ProVE® MHC I 类五聚体采用快速、高通量、平行合成方法制成。它们以未标记的形式提供,至少 20 次测试(一个测试标记 1-2 x 106 个细胞)。提供单独的 Pro5® Fluorotag(R-PE 或 APC 标记)用于两层荧光染色。每个 Pentamer 都使用 ELISA 进行了 QC 测试,并在 4°C 下保存 3 个月。在 -80°C 下储存未标记的五聚体可延长保质期。

ProVE® 五聚体适用于流式细胞术中抗原特异性 T 细胞的多重染色。这使用户能够非常快速地识别和定量单个抗原特异性 T 细胞的不同群体,并获得新 T 细胞表位的结论性验证。

借助 ProImmune REVEAL® 和 ProVE® 技术,可以从重叠库中的大量肽开始,筛选 6 个 MHC 等位基因,识别候选肽并提供相应的 ProVE® 五聚体,以便在短短十到八分钟内对临床样本进行测试十五个工作日。

模块 4:速率分析

目的:确定候选肽的定量开启和关闭率

在初始 MHC 肽结合分析完成后的任何阶段,客户都可以要求额外的开/关速率分析,以定量了解各个肽的结合特性。这些测定对于中间亲和肽可能特别重要。与具有快速结合率的肽相比,此类肽与特定 MHC 等位基因的结合可能较弱。然而,如果它们的解离速率较慢,一旦肽被结合,它可能会呈现相当长的一段时间,值得作为潜在表位进一步研究。

Figure 2: 测试肽的结合率(左)与中间对照肽的结合率(完全速率测定)进行比较。

Figure 3: 测试肽(左)与中间对照肽(完全速率测定)的解离率比较。

模块 4 有两个选项,快速检查率分析和完整率分析。

快速检查偏离率测定

模块 4 的“快速检查”选项必须与模块 3 ProVE® Pentamers 一起订购。 MHC-肽复合物的解离率是在 0h、2h 和 24h,在 37°C 下测量的。结果以图形和半衰期值的形式提供。 Quick Check off-rate 检测提供了与肽呈递时间足够长以使其成为良好 T 细胞表位的可能性相关的信息。该分析的结果可以与 MHC 肽结合试验的结果相结合,这通常比组装复合物的稳定性更强烈地反映肽的接通率特性。结果不如“完整速率分析”那样定量,后者更全面地确定开关率,但快速检查分析的成本显着降低。结果可以作为一种经济有效的方法来确定哪些 ProVE® 五聚体应该首先用于细胞样本。这使用户能够优化细胞样本的使用和测试所需的时间。

完整的速率分析

可以在表位发现过程中的任何时候订购“完整速率测定”。通过 MHC 结合试验的肽的开启和关闭率在 48 小时(开启率)和 24 小时(关闭率)的六个点进行测量。结果以图形和表格形式显示为半衰期值。根据两种速率的结果对肽进行动力学评分;分数越高表明候选 T 细胞表位越好。最后,为每个肽定义了“R”分数。这将动力学评分与 MHC-肽结合测定评分结合在一起; R分数越高,表位越好。速率分析的分数作为一般指南提供;肽表位应使用五聚体的抗原特异性 T 细胞检测进行验证。 Complete Rate Assay 模块非常适合深入研究五聚体的肽呈递,并将肽动力学与其他定量分析(例如五聚体染色和功能分析)进行比较。

订购

ProImmune REVEAL® & ProVE® 定制服务是根据客户的个性化需求量身定制的。联系我们为您的项目提供具体报价。报价将反映所选模块和所选每个选项的价格。请求报价

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