CD1d 四聚体

世界领先检测NKT细胞工具

用CD1d四聚体检测NKT细胞

ProImmune是在世界商业领先提供人类和小鼠荧光标记的CD1d四聚体。

CD1d-脂质复合物跟NKT细胞受体在一个特别具体(取决于用的脂质配体),允许用流式细胞化验来检测和列举抗原特异性CD1d-限制NKT细胞。

我们的四聚体能展现高亮度和实验重复性。为了避免客户溶解和安装的困扰,最常用的配体,α半乳糖神经酰胺alpha-Galactosyl Ceramide* (α-GalCer),预装在四聚体上。我们也可以供应未装的四聚体让客户任选配体。

  • 人类和小鼠CD1d四聚体预装上α-GalCer*,或未装
  • 人类和小鼠CD1d四聚体消极控制
  • R-PE或APC荧光标记
  • 50,150或500测试

重要出版物

Engkilde, K. et al. (2010). “Prevention of diabetes in NOD mice by repeated exposures to a contact allergen inducing a sub-clinical dermatitis.” PLoS One. 11;5(5):e10591.[PubMedID:20485668]

kaplan-meier curve

图1:重复应用纯化蛋白衍生物(PPD)抑制糖尿病的发展在无肥胖糖尿病(NOD)的小鼠。在图里显示了卡普兰煤业分析在于四个小鼠组糖尿病的状况。DNCB-rep, PPD-rep和Water,指的是小鼠组重复的暴露到DNCB,PPD和Water在每一个星期。PPD-induc是脂小鼠组暴露到PPD在第四个星期的生命。NOD的小鼠暴露到重复的PPD,显示47%累积性的糖尿病,相反的93%在Water治疗小鼠组 (P=0.004)。数秩测验展现给了意义P=0.008。

NKT细胞背景资料

NKT细胞牵连到监管免疫反应对于很多相关的病毒和跟许多必要的免疫领域上。NKT细胞代表独特淋巴细胞群共表达NK细胞标记和半不变的T细胞受体。当被CD1d-限制的糖脂抗原激活后,NKT细胞产生大量的Th1-类和/或Th2-类的细胞因子造成下游的树突状细胞,NK细胞,B细胞和T细胞都被激活。NKT细胞的功能障碍或不足显示了会造成自生免疫性病毒(比如糖尿病或动脉粥样硬化)和癌症,还有牵连到人类哮喘病毒级数。

CD1d四聚体分子是古典的MHC分子可以特征为非多态性,保守的种类和含有狭窄,深沟,疏水配体结合的口袋。这些结合口袋能够呈现糖脂和磷脂给NKT细胞结合。

特征为最好的CD1d配体是α-GalCer,最初是从海绵提取物。呈现α-GalCer在CD1d分子能造成NKT细胞承认和快速的生产大量IFN-γ和IL-4,赐给α-GalCer治疗效果。最近,lysomal sphingolipid isoglobotrihexosylceramide (iGB3)鉴定成CD1d配体。这个内源性的鞘脂以为是NKT细胞发展的主管。

人类CD1d消极控制四聚体

ProImmune人类的荧光标记CD1d四聚体消极控制是模拟安装上了支架(无配体安装)和不能跟NKT细胞结合。消极控制的用处是和配体安装上的CD1d四聚体一起应用。这样能让低频率群准确的量化。注意:消极控制CD1d四聚体不能安装配体。

实验数据

人类CD1d四聚体和消极控制死聚体

Example data for human CD1d tetramer

图2:1 X 106 PBMCs孵育在一个测试(0.5µl)APC标记,α-GalCer预装人类CD1d四聚体(左边图片),或一个测试(0.5µl)APC标记,消极控制人类CD1d四聚体(右边图片)对于30分钟在4°C。加血来冲洗细胞然后孵育对于30分钟再4°C用抗-CD3 FITC标记和抗-CD19 PE标记在于50 µl总容积。接着两个冲洗细胞程序然后用流式细胞化验检测。无特异性染色从图片淘汰专注在CD19-负细胞然后绘制CD1d四聚体对CD3。

ProImmune人类CD1d四聚体也显示染色PBMCs从恒河猴猕猴 – 客户的数据

小鼠CD1d四聚体

Dr. Markus Skold and Dr. Sam Behar, Harvard Medical School (USA),测试ProImmune小鼠CD1d R-PE标记四聚体用脾从幼稚的B6小鼠耗尽了B细胞。用的四聚体是未或预安装上α-GalCer。细胞也被染上了抗-CD4-Alexa488和抗-CD3-PerCP单克隆抗体和专注在活,CD3-正细胞。

Mouse CD1d tetramer staining

图3:为了减少背景染色,脾耗尽了B细胞用CD19微珠(Miltenyi Biotec)。程序上用了3 X 105细胞在每一个染色。细胞孵育跟2.4G2单克隆抗体在25µg/ml在50µl的样本,在4°C对于15分钟为了拦住Fc受体。然后一个冲洗,细胞就孵育和一个测试(2µl)小鼠CD1d四聚体在于30分钟。接下来,细胞孵育对于4°C在20分钟和抗-CD4-Alexa488和抗-CD3PerCP单克隆抗体在50µl总容积。最后再冲洗两次,细胞能获得和用流式细胞化验检测。

产品说明书

CD1d四聚体预装上α-GalCer

CD1d四聚体消极控制四聚体

CD1d四聚体未装